舌鳞状细胞癌顺铂耐药细胞系细胞周期蛋白D1 RNA干扰的体外研究

作者：周晓健; 张志愿; 张萍; 潘红芽; 陈万涛; 叶冬霞

来源：中华口腔医学杂志, 2006, (11): 646-649.

• 癌,鳞状细胞
• 顺铂
• 基因,bcl-1

目的用人工合成的耐药相关基因细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的小分子干扰RNA(siRNA)处理人舌鳞癌顺铂耐药细胞系(Tca8113-CDDP),探讨对靶基因转录调控的作用效果以及剂量和时间效应关系,为耐药性逆转提供实验依据。方法CY3荧光素标记阳性对照基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)siRNA,分别于转染后4、24、48、72h在激光共聚焦显微镜下观察瞬时转染率,优化转染条件。用SYBR(绿色荧光染料法、实时定量PCR技术分析目的基因mRNA的表达情况,同时采用蛋白印迹(Westernblot)检测目的基因蛋白水平的表达。四甲基偶氮唑盐法检测cyclinD1siRNA处理后细胞对顺铂敏感性的影响。结果优化转染条件后,Tca8113-CDDP细胞中CY3的GAPDHsiRNA转染率达90%以上。转染cyclinD1siRNA后24、48hmRNA表达的抑制率为81.6%、80.7%,72h最为明显,为94.3%。在低于100nmol/L浓度下,RNA干扰抑制与剂量大小有关;当剂量进一步加大时,抑制效应则维持在“平台期”。转染24、48和72h后,cyclinD1蛋白的表达也明显下降。siRNA干扰组和对照组细胞在顺铂作用后细胞生长抑制率分别为58.4%、34.8%。结论化学合成的cyclinD1siRNA在体外实验中,对Tca8113-CDDP细胞中目的基因的沉默提高了细胞对顺铂敏感性,并呈现剂量和时间依赖效应。

• 单位
  上海交通大学医学院附属第九人民医院