肝片吸虫SAP-2蛋白的基因克隆、表达及其诊断潜力初步评估

作者：王熙凤; 乔军; 孟庆玲^*; 陈英; 钟文强; 贡莎莎; 黄运福; 才学鹏

来源：西南农业学报, 2018, 31(12): 2704-2709.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2018.12.040

• 肝片吸虫
• SAP-2基因
• 原核表达
• 间接ELISA
• 诊断潜力

【目的】为了研究肝片吸虫(Fh) SAP-2蛋白的反应原性及作为Fh血清学诊断抗原的潜力。【方法】本研究利用RT-PCR方法对Fh SAP-2基因进行扩增,将扩增产物克隆入p MD19-T载体后测序,对其进行分子特征分析;构建原核表达载体p ET-SAP-2,在E. coli BL21(DE3)中进行表达,通过SDS-PAGE和Western blot对表达的重组蛋白进行反应原性分析;以纯化的重组蛋白SAP-2(re SAP-2)为抗原,建立了检测Fh特异性抗体的间接ELISA,评估了SAP-2蛋白作为Fh血清学诊断抗原的潜力。【结果】Fh SAP-2基因全长306 bp,编码101个氨基酸。在线软件分析发现,SAP-2为疏水性、无跨膜区蛋白,信号肽位于第1～15个氨基酸之间。系统进化树分析表明,Fh SAP-2与曼氏裂体吸虫同源性最高,与其他寄生虫存在较大的差异。Western blot证实,re SAP-2蛋白可被Fh阳性血清特异性识别,有较强的反应原性。用re SAP-2蛋白建立了间接ELISA,对23份Fh阳性血清和10份阴性血清进行检测,结果证实re SAP-2蛋白有良好的特异性和敏感性。【结论】Fh SAP-2蛋白具有较强的反应原性,具有作为Fh血清学诊断抗原的潜力。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 动物科技学院; 石河子大学