利用重组工程技术标记鼠疫菌rpoS基因

作者：张建山; 陈泽良; 宋亚军; 郭兆彪; 王津; 王红霞; 翟俊辉; 杨瑞馥

来源：中国生物工程杂志, 2006, (05): 27-32.

DOI：10.13523/j.cb.20060506

• 融合PCR
• λRed重组系统
• 基因标记
• Western blot

目的:为便于研究鼠疫菌基因及其产物的功能,利用重组工程技术,建立一种表位标记细菌染色体基因的方法,以分析基因的表达规律。方法:将标签序列合成于引物中,通过融合PCR法将标签序列与抗性筛选基因连接,克隆到pBluescript载体,获得模板载体pBSMH。设计与待标记基因末端及其下游同源的引物,从模板载体上扩增标签与抗性基因的融合模块,获得两端带同源区的PCR产物,电击转化鼠疫菌感受态细胞。在λRed重组系统的辅助下,标签和抗性基因重组到目的基因的下游,得到表位标签与目的基因C末端融合的重组子。利用针对表位标签的单克隆抗体进行Westernblot分析,验证C末端标记目的蛋白的表达。结果:成功构建了组氨酸标签与抗性基因融合的质粒,以该质粒作为模板,扩增标记标签盒,对鼠疫菌的rpoS基因进行了标记,利用针对组氨酸标签的抗体能够检测到rpoS基因的表达。结论:基于重组工程的基因标记技术可以为基因功能研究提供一个有价值的研究手段。

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院