半胱氨酰白三烯受体1调节APP/PS1小鼠原代神经元β淀粉样蛋白生成及机制

作者：龙燕; 柯璇; 洪浩^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2022, 36(02): 81-89.

• 半胱氨酰白三烯受体1
• β淀粉样蛋白
• NF-κB P65
• 核定位序列
• 核转位

目的 探究半胱氨酰白三烯受体 1(CysLT1R)对体外培养的 APPswe/PS1?E9 双转基因小鼠(APP/PSI 小鼠)皮质原代神经元 β 淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及机制。方法 (1) 将携带 CysLT1R 的慢病毒-绿色荧光蛋白载体(LV-CysLT1R-EGFP)或空载体(LV-EGFP)转染至 APP/PS1 小鼠皮质原代神经元，使神经元过表达 CysLT1R(CysLT1R-OE)，采用 Western 印迹法检测神经元 CysLT1R 蛋白表达水平。(2) 分别以 CysLT1R激动剂YM17690(1 μmol·L-1)单用或与CysLT1R拮抗剂普仑司特(Pran 1 μmol·L-1)联用处理CysLT1R-OE神经元 12 h；采用 ELISA检测细胞培养基内 Aβ1-40和 Aβ1-42水平；Western印迹法检测神经元中淀粉样前体蛋白(APP)、β 淀粉样前体蛋白切割酶 1(BACE1)、早老素(PS)1 和 PS2 表达水平。以YM17690(1 μmol·L-1)单用或与 Pran(1 μmol·L-1)联用处理 CysLT1R-OE 神经元 2 h后，采用 Western 印迹法检测 CysLT1R 和 NF-κB P65 亚基在细胞内的分布。(3) 采用渗透差法在 CysLT1R-OE 神经元中导入核定位序列多肽(NLS-pep,10 g·L-1)竞争性抑制CysLT1R核转位或阴性对照多肽(NON-pep,10 g·L-1)，随即以YM17690(1 μmol·L-1)处理 CysLT1R-OE 神经元 12 h，采用 Western 印迹法检测 CysLT1R 激活后细胞培养基内Aβ水平、胞质中APP和BACE1表达水平；以YM17690(1 μmol·L-1)处理导入多肽后的CysLT1R-OE神经元2 h，采用Western印迹法检测CysLT1R和NF-κB P65亚基在细胞内的分布。结果 (1) CysLT1R-OE 神经元 CysLT1R 蛋白表达水平较对照组显著增加(P<0.01)。(2) 与 CysLT1R-OE 组相比，CysLT1R-OE+YM17690 组神经元分泌 Aβ1-40和 Aβ1-42显著增加(P<0.05)，胞质中 BACE1 及细胞核中 CysLT1R和 NF-κB P65 亚基表达水平显著增加(P<0.05)，而神经元中 APP,PS1 和 PS2 表达水平无明显改变。YM17690 和Pran 联用(CysLT1R-OE+YM17690+Pran 组)可消除上述改变。(3) 与 CysLT1R-OE+YM17690 组相比，CysLT1R-OE+NLS-pep+YM17690 组 CysLT1R 和 NF-κB P65 亚基在细胞核内的表达水平显著下降(P<0.05)，神经元分泌 Aβ1-40和 Aβ1-42显著下降(P<0.05)，胞质中 BACE1表达水平下调(P<0.05),APP未见显著改变。结论 CysLT1R 被激活后，通过上调 BACE1 表达从而促进 Aβ 的生成，其机制可能是通过CysLT1R发生核转位并激活NF-κB信号通路介导。

• 单位
  中国药科大学