蓝舌病毒NS4基因真核表达对IFN-β信号通路基因mRNA表达的影响

作者：林俊泓; 赵瑶; 陈玉娟; 王让; 马鲜平^*; 易华山^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(02): 199-207.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.02.01

• 蓝舌病毒
• NS4基因
• IFN-β
• 仙台病毒

通过构建蓝舌病毒(BTV)NS4基因真核表达载体pcDNA3.1-NS4-eGFP,转染HEK-293T细胞，利用Western blot及荧光显微镜分析NS4蛋白的表达与亚细胞定位特征；pcDNA3.1-NS4-eGFP转染的HEK-293T细胞添加20 HAU/mL仙台病毒(SeV)刺激后，qRT-PCR法分析NS4基因表达对SeV诱导的上游识别基因RIG-Ⅰ、MDA5、VISA、TBK1、IKKε、IRF3、TRAF3、TRAF6、IRF9、干扰素基因(IFN-α、IFN-β)以及干扰素刺激基因ISG15和USP18的mRNA表达水平的影响。在HEK-293T细胞内转染pcDNA3.1-NS4-eGFP质粒24 h后，分别添加20 HAU/mL SeV刺激24,48 h, qRT-PCR结果表明，细胞内表达NS4-EGFP后，RIG-Ⅰ、MDA5、TRAF6、IRF9、ISG15及IFN-β基因mRNA表达极显著下降，随着SeV诱导时间的延长，VISA、TBK1、IKKε、USP18基因mRNA表达差异呈不显著趋势。本研究成功构建BTV NS4基因真核表达载体pcDNA3.1-NS4-eGFP,NS4-EGFP融合蛋白在HEK-293T细胞中主要分布于细胞核周围及细胞核内。BTV NS4基因在HEK-293T细胞内的表达显著下调SeV诱导的IFN信号通路相关基因RIG-Ⅰ、MDA5、TRAF6、IRF9、ISG15和IFN-β的表达，为进一步探究NS4基因在BTV拮抗宿主细胞免疫应答中的机制奠定基础。

• 单位
  西南大学