大鼠脑组织NT-3融合蛋白的表达、纯化及抗体制备

作者：李志全; 胡蕴玉; 朱庆生; 朱锦宇; 刘方

来源：基础医学与临床, 2007, (03): 324-328.

• 大鼠
• NT-3基因
• 基因表达
• 蛋白纯化

目的克隆大鼠脑组织神经营养素3(NT-3)基因,原核诱导表达并纯化,制备高效价抗体,为研究其对周围神经损伤修复的影响提供实验基础。方法用RT-PCR法扩增目的基因,依次克隆入pMD-18T载体及亚克隆入pRSET-A原核表达载体。导入大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定后用镍柱纯化。免疫家兔制备特异性抗体。结果RT-PCR得到777 bp的片断,酶切鉴定及测序证实与GeneBank中大鼠NT-3序列一致,成功构建了原核表达载体pRSET-A-NT-3。导入BL21诱导得到一条约34 ku的新蛋白带。免疫家兔获得1∶64000的高效价特异性抗大鼠NT-3血清。

• 单位
  第四军医大学; 西京医院