转录因子AP-4基因真核表达载体构建及表达分析

作者：吴华彰; 公丕海; 吴涛; 赵云利; 汤必奎; 陈文静; 刘牧林; 樊红^*

来源：基因组学与应用生物学, 2019, 38(05): 2270-2275.

DOI：10.13417/j.gab.038.002270

• 转录因子
• AP-4
• 载体构建
• 真核表达

本研究利用生物信息学分析AP-4与胃癌患者临床病理信息的相关性,根据GenBank中人AP-4基因cDNA序列设计并合成特异性引物,以胃癌细胞总RNA逆转录的cDNA为模板,利用高保真酶扩增AP-4基因CDS (Coding DNA sequence)序列并构建入pcDNA3.1+载体,并通过限制性内切酶酶切分析和测序法进行进一步验证;脂质体法将AP-4重组表达载体及对照pcDNA3.1+载体转染胃癌细胞,qRT-PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction)和Western blotting检测分别检测AP-4在m RNA和蛋白水平的表达。生物信息学分析发现,AP-4的表达与胃癌分期及预后显著相关;酶切及测序分析表明,转录因子AP-4真核表达载体构建成功,并能够在胃癌细胞中实现转录和蛋白水平的高效表达。此研究为深入研究转录因子AP-4在胃癌等肿瘤发生发展中的作用及分子机制奠定了基础。

• 单位
  蚌埠医学院第一附属医院; 蚌埠医学院; 东南大学