摘要
目的确定HSD1与微管蛋白在生精细胞中的定位关系,为进一步研究其在精子发生中的功能奠定基础。方法通过分子克隆方法构建GFP-HSD1和FLAG-HSD1的真核表达质粒,转染精母细胞系GC-2spd(ts),同时筛选稳定表达FLAG-HSD1的细胞株。应用免疫荧光实验观察外源和内源表达的HSD1与微管蛋白α-tubulin在GC-2spd(ts)或小鼠原代生精细胞中的定位分布。结果成功构建稳定表达FLAG-HSD1融合蛋白的GC-2spd(ts)细胞株。外源表达HSD1在GC-2 spd(ts)中与α-tubulin明显共定位;内源表达HSD1与α-tubulin在GC-2spd(ts)和原代小鼠生精细胞中明显共定位。结论 HSD1与微管蛋白α-tubulin在生精细胞中存在明显的共定位关系。
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单位医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院