金雀异黄素通过下调HDAC6减轻LPS诱导的大鼠背根神经节神经元炎性损伤

作者：周松林; 黄俊卿^*; 李科; 都帅刚; 杨彬; 郭中华

来源：中南大学学报(医学版), 2022, 47(06): 707-716.

• 金雀异黄素
• 神经病理性疼痛
• 背根神经节神经元
• 组蛋白脱乙酰化酶6
• 脂多糖

目的：神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是一种由躯体感觉神经病变或疾病引起的慢性疼痛，金雀异黄素(genistein,Gen)可能是治疗NP的潜在药物。因此，本研究旨在探讨Gen对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠背根神经节神经元(dorsal root ganglion neuron,DRGn)炎性损伤的作用及其可能的分子机制。方法：取出生1 d的幼年大鼠进行DRGn的分离和培养。取对数生长期的DRGn，分为8组：对照组、LPS组、Tubastatin A盐酸盐(tubastatin A hydrochloride,TSA)+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组、Gen2+TSA+LPS组、Gen2+pcDNA-组蛋白脱乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组。LPS组给予1μg/mL LPS处理24 h;TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组给予5μmol/L TSA、5μmol/L Gen、10μmol/L Gen预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+TSA+LPS组给予10μmol/L Gen和5μmol/L TSA共同预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组将100 nmol/L pcDNA-HDAC6、pcDNA3.1质粒分别转染至DRGn，转染24 h后，给予10μmol/L Gen预处理0.5 h，再加入1μg/mL LPS处理24 h。采用real-time RT-PCR检测DRGn中HDAC6 mRNA的表达水平，CCK-8法检测DRGn活力，流式细胞术检测DRGn凋亡情况，ELISA检测DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平；蛋白质印迹法检测DRGn中HDAC6、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、NF-κB p65的蛋白质表达水平。结果：与对照组相比，LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平，TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加，DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高，DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)。与LPS组相比，TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组和Gen2+TSA+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平，TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著下调，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著降低，DRGn活性显著升高且凋亡率显著降低，DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(均P<0.05)，且Gen2+TSA+LPS组上述变化最明显。与Gen2+LPS组相比，Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平，TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加，DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高，DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)。结论：Gen可减轻LPS诱导的大鼠DRGn炎性损伤，其作用机制可能与下调HDAC6的表达，进一步抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活有关。

• 单位
  河南省中医院