高糖环境培养、lncRNA 58992过表达SV40中lncRNA 58992和纤维化标志物表达观察

作者：丁明璐; 王小花; 刘海峰^*

来源：山东医药, 2022, 62(15): 54-57.

• 长链非编码RNA 58992
• 肾小球系膜细胞
• α-平滑肌肌动蛋白
• 纤维连接蛋白
• Ⅰ型胶原

目的 观察高糖环境培养的肾小球系膜细胞系SV40中长链非编码RNA 58992(lncRNA 58992)的表达变化,以及过表达lncRNA 58992的肾小球系膜细胞系SV40中纤维化细胞因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达变化。方法 将肾小球系膜细胞系SV40分为3组,分别为NG+58992组、HG组、NG组。NG+58992组经lipofectamine 8000转染质粒pcDNA 3.1-lncRNA 58992 24 h,再经低糖(5 mmol/L)环境培养24 h。HG组低糖环境培养24 h后再经高糖(25 mmol/L)环境培养24 h。NG组以低糖环境培养48 h。采用qRT-PCR检测肾小球系膜细胞系SV40中lncRNA 58992、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(ColⅠ) mRNAs;采用Western blotting检测肾小球系膜细胞系SV40中FN和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);细胞免疫荧光法检测ColⅠ、α-SMA和FN蛋白。结果 HG组、NG组中lncRNA 58992的相对表达量分别为1.45±0.22、1.00±0.03,两组比较,P<0.05。NG+58992组、HG组、NG组FN mRNA相对表达量分别为8.78±1.86、13.17±1.95、1.00±0.01,ColⅠmRNA相对表达量分别为2.40±0.41、4.16±0.83、1.00±0.06;NG+58992组、HG组、NG组FN、Col I mRNA相比,P均<0.05。NG+58992组、HG组、NG组FN蛋白相对表达量分别为0.75±0.24、0.91±0.17、0.27±0.13,α-SMA蛋白相对表达量分别为0.28±0.03、0.59±0.06、0.14±0.03,与NG组相比,NG+58992组、HG组中FN、α-SMA蛋白相对表达量高(P均<0.05)。细胞免疫荧光实验结果表明,NG组中ColⅠ、α-SMA和FN蛋白均有少量的红色荧光(该蛋白在细胞中存在本底表达),而HG组和NG+58992组中ColⅠ、α-SMA和FN的红色荧光均增强。结论 高糖环境培养的肾小球系膜细胞系SV40中lncRNA 58992表达上调;过表达lncRNA 58992可使肾小球系膜细胞系SV40中α-SMA、FN和ColⅠ的表达上调、促进SV40的纤维化发生。

• 单位
  牡丹江医学院