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摘要
目的：制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb)，并对其生物学功能进行初步鉴定。方法：从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列；构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体，并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株；SDS-PAGE检测mAb纯度；ELISA测定mAb效价；SPR测定mAb的亲和力；BCA法检测mAb浓度；CCK-8法检测T细胞增殖情况；ELISA和Western blot确定mAb结合表位范围；使用Discovery Studio软件对单抗表位进行分析。结果：从杂交瘤细胞成功扩增出抗体可变区基因，筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO-K1细胞株；细胞培养上清中mAB浓度为1.82 mg/ml,ELISA有效效价为1.97×105左右，亲和力为3.72×10-9kD;CCK-8结果表明嵌合单抗可以阻断B7-H4-Fc分子对T细胞增殖的抑制作用；表位分析结果表明嵌合mAb主要以氢键和疏水作用与B7-H4 IgC域结合。结论：本研究成功制备了抗B7-H4的人鼠嵌合单抗，可在体外有效地阻断B7-H4-Fc对T细胞增殖抑制作用并为B7-H4抗体药物研发提供了前期基础。
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单位广东医科大学; 基础医学院
