黄芪甲基化敏感扩增多态性(MSAP)扩增引物筛选及初步应用

作者：宗凯; 赵营莉; 周莉质; 李秀秀; 宫鹏; 夏泉

来源：安徽农业科学, 2017, 45(29): 149-152.

DOI：10.13989/j.cnki.0517-6611.2017.29.045

• 黄芪
• 甲基化敏感扩增多态性
• 选择性扩增
• 聚类分析

[目的]建立并优化黄芪甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术扩增反应体系,对中药材黄芪甲基化水平进行研究。[方法]磁珠法提取黄芪DNA后,采用Hpa II/Msp I 2种内切酶进行酶切,将酶切产物加上连接接头序列,经预扩增和选择性扩增反应,最终从黄芪MSAP的256对引物中筛选出最佳分辨引物4对。应用筛选到的4对引物,分析12种不同产地黄芪的甲基化模式,并对甲基化水平聚类分析。[结果]经MSAP检测12个黄芪样本半甲基化率在12.5%26.7%,全甲基化率在25.6%51.1%,总甲基化率在48.7%73.5%,总体上黄芪样本的全甲基化率大于半甲基化率。采用NTSYSpc软件对黄芪样品Hpa II和Msp I多态性数据进行分析,获得UPGMA聚类图和主成分分析PCA图。[结论]MSAP技术能够很好地用于黄芪的甲基化分析,结合NTSYSpc软件能对不同产地黄芪之间甲基化水平进行聚类分析,且初步分析结果表明从UPGMA和PCA图上来看,地区相近的单株聚类分析表现出了一定的地域性。

• 单位
  安徽医科大学第一附属医院