基于Wnt5a/Ca~(2+)/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca~(2+)载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用

作者：丁芮; 周鹏; 王翔; 汤同娟; 王恩宇; 洪星辉; 王靓; 黄金玲^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(12): 1-11.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220727

• 小陷胸汤
• 胃癌
• 侵袭转移
• 上皮间质转化
• Wnt5a/Ca~(2+)/活化T细胞核因子(NFAT)信号通路

目的：探讨小陷胸汤对转化生长因子-β_1(TGF-β_1）诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响，并探讨其可能的机制。方法：通过CB-DOCK在线平台（http：//clab.labshare.cn/cb-dock/）预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子（NFAT）分子对接。使用质量浓度为10μg·L~(-1)的TGF-β_1建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组（0.1、0.2、0.4 g·L~(-1)），为进一步探讨Wnt5a/Ca~(2+)/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用，将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞，分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤（0.4 g·L~(-1)）组和Wnt5a-OE+小陷胸汤（0.4 g·L~(-1)）组。分别使用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指蛋白（Snail）、Wnt5a/Ca~(2+)/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p)-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca~(2+)浓度变化。结果：分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca~(2+)/NFAT信号通路。与模型组比较，小陷胸汤（0.1、0.2、0.4 g·L~(-1)）能明显促进MGC-803细胞活力的丧失，可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞，并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合，并促进E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达（P<0.05,P<0.01）。进一步实验表明，与模型组比较，小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca~(2+)浓度，且可逆转Wnt5a的作用（P<0.05,P<0.01）。结论：小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca~(2+)/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化（EMT），从而减弱TGF-β_1诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。

• 单位
  安徽中医药大学; 安徽省中医药科学院