新疆巴什拜羊ISG15基因的克隆表达及活性检测

作者：鲁海富; 沈文; 崔茹鹏; 杨文; 姜方配; 孙延鸣

来源：江苏农业科学, 2013, (07): 26-29.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2013.07.137

• 巴什拜羊
• ISG15
• 克隆表达
• 活性检测

克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞...

• 单位
  石河子大学