乳腺癌外泌体miR-222-3p靶向CDKN1B诱导肿瘤相关成纤维细胞的形成

作者：李新涛; 胡珍; 陈南征; 李朱斌; 马少君

来源：临床和实验医学杂志, 2021, 20(20): 2144-2148.

• 乳腺癌
• miR-222-3p
• 肿瘤相关成纤维细胞

目的探究乳腺癌外泌体miR-222-3p靶向CDKN1B对肿瘤相关成纤维细胞形成的影响及机制。方法HKF细胞分为MCF7 exo组、MDA-MB-231 exo组、MCF10A exo组和PBS组(HKF细胞分别与10μg/m L的MCF7exo、MDA-MB-231 exo、MCF10A exo以及等体积的PBS共孵育72 h),miR-NC组、miR-222-3p mimic组和miR-222-3p inhibitor组(HKF细胞分别转染Negative Control、miR-222-3p mimic、miR-222-3p inhibitor),miR-NC exo组和miR-222-3p mimic exo组(HKF细胞分别与10μg/m L的miR-NC exo和miR-222-3p mimic exo共孵育72 h),miR-222-3p mimic exo+CDKN1B组(HKF细胞与miR-222-3p mimic exo共孵育72 h后转染CDKN1B质粒)。提取乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-231、乳腺上皮细胞MCF10A所分泌的外泌体(MCF7 exo、MDA-MB-231 exo和MCF10A exo),实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测上述外泌体中miR-222-3p的表达。蛋白质印迹法检测上述各组HKF细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP)-9、MMP-2、MMP-14、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、纤连蛋白(fibronectin)、波形纤维蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),双荧光素酶报告基因实验检测miR-222-3p和周期蛋白依赖激酶抑制因子1B (CDKN1B)结合。结果与PBS组相比,MCF7 exo组、MDA-MB-231 exo组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P <0.001)。与miR-NC组细胞相比,miR-222-3p mimic组细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P <0.001),miR-222-3p inhibitor组细胞上述标志物表达显著降低,差异均有统计学意义(P <0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果显示CDKN1B为miR-222-3p的靶基因。MCF7 exo组(4.00±0.31)、MDA-MB-231 exo组(5.94±0.14)中miR-222-3p表达显著高于MCF10A exo组(1.00±0.00),差异有统计学意义(P <0.001)。与miR-NC exo组相比,miR-222-3p mimic exo组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著增加,差异均有统计学意义(P <0.001);与miR-222-3p mimic exo组相比,miR-222-3p mimic exo+CDKN1B组HKF细胞MMP-9、MMP-2、MMP-14、FAP、fibronectin、vimentin、α-SMA表达显著减少,差异均有统计学意义(P <0.001)。结论乳腺癌外泌体miR-222-3p通过抑制CDKN1B表达而促进肿瘤相关成纤维细胞的形成。

• 单位
  西安交通大学第一附属医院; 陕西省肿瘤医院; 西安市妇幼保健院