体外STAT 5诱骗寡核苷酸技术的实验研究

作者：曾建明; 冯文莉; 王小中; 史梅; 陈敏; 刘兴; 涂植光; 黄宗干

来源：临床检验杂志, 2006, 24(5): 355-358.

DOI：10.3969/j.issn.1001-764X.2006.05.014

• 信号转导和转录活化因子5
• 转录因子
• 诱骗核苷酸
• 转染
• K562细胞

目的 优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT 5)诱骗寡核苷酸(decoyoligodeoxynucleotide,decoy ODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT 5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础.方法 设计并合成STAT 5 decoy ODNs、FAM荧光标记的decoy ODNs和decoy ODNs突变型(M-decoy ODNs);SDS-PAGE检测不同退火缓冲液条件下decoy ODNs双链形成率;倒置荧光显微镜下通过阳性细胞计数比较DEAE、lipofectin和DMRIE-C 3种转染试剂对decoy ODNs的转染效率;流式细胞仪(FCM)检测转染12、24和72 h时FAM-decoy ODNs摄取率和荧光强度,检测decoy ODNs的稳定性;MTT实验检测decoy ODNs对K562细胞活力的影响;RT-PCR检测decoy ODNs对pim-1和c-myc基因表达的影响.结果 退火缓冲液(10 mmol/L Tris,pH 8.0,50 mmol/L NaCl,1 mmol/L EDTA)更有利于decoy ODNs双链形成.DMRIE-C的转染效率(99.2±4.6)%高于DEAE和lipofectin(67.15±7.3)%、(83.2±3.8)%,P＜0.05,并且DMRIE-C介导decoy ODNs转染12、24、72 h的转染效率均＞98%.MTT实验发现DMRIE-C的细胞毒性低,细胞活性为94.23%,decoy ODNs处理组能显著抑制K562细胞MTT还原能力,与其余组相比具有显著性差异(P＜0.05);RT-PCR结果发现decoy ODNs处理组pim-1基因下降了71.20%,c-myc下降了59.46%,与其余组相比有统计学意义(P＜0.05).结论 建立了decoy ODNs最佳的双链形成条件;DMRIE-C能显著增强decoy ODNs转染K562细胞的效率;decoy ODNs能抑制K562细胞活力,抑制STAT 5靶基因的转录.

• 单位
  重庆医科大学