生物法合成肠炎沙门菌糖蛋白

作者：李梦如; 刘恩; 张文芋; 罗洪艳; 李沛

来源：生物工程学报, 2022, 38(06): 2377-2388.

DOI：10.13345/j.cjb.210855

• 生物法
• 糖蛋白
• 肠炎沙门菌
• CRISPR/Cas9方法
• PglL

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)是一种重要的人兽共患病原菌，在对该菌感染的预防与控制上一直存在困难，而糖蛋白疫苗的出现为其预防提供了新的思路。对于糖蛋白的合成，一般采用传统的化学交联方法，该法制备流程烦琐、生产成本高。因此，探索经济且稳定的生物合成方法非常必要。为了实现生物法合成肠炎沙门菌糖蛋白，本研究利用CRISPR/Cas9方法构建肠炎沙门菌waa L基因缺失株SEΔwaa L，使用银染的方法检测细菌外膜脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的合成情况。使用环形PCR方法构建了表达寡糖转移酶PglL、重组铜绿假单胞菌的外毒素(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)和霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)的表达质粒，并分别在rEPA的N端和CTB的C端加入了PilES45-K73糖基化位点序列。将重组质粒转化到SE ΔwaaL中，诱导表达后通过Western blotting方法对糖蛋白的合成进行验证，并通过镍柱(Ni-NTA)对糖蛋白进行纯化。结果表明，waaL基因的缺失阻断了肠炎沙门菌LPS正常合成，在该缺失株中rEPA和CTB蛋白均可成功表达。此外，在表达寡糖转移酶PglL的情况下，rEPA和CTB发生了明显的糖基化，其糖基化部分为肠炎沙门菌O抗原多糖。本研究结果证明肠炎沙门菌缺失waaL基因后，在寡糖转移酶PglL的作用下可以将自身O抗原多糖链共价连接到载体蛋白rEPA和CTB上，形成糖蛋白，为生物法合成肠炎沙门菌糖蛋白的研究奠定了基础。

• 单位
  西南大学