高糖环境诱导视网膜细胞衰老的实验研究

作者：刘荣; 李斌; 胡维琨; 张思静; 詹新媛; 项楠

来源：中华实验眼科杂志, 2014, 32(11): 970-974.

DOI：10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.11.003

• 细胞衰老
• β-半乳糖苷酶
• 糖尿病视网膜病变

背景细胞衰老在血管功能失调性疾病中的作用越来越受到人们的重视,人们推测细胞衰老可能参与糖尿病相关血管并发症的发生及发展,而目前检测细胞衰老的主要标志是β-半乳糖苷酶表达的上调。目的证实高糖环境对牛视网膜血管内皮细胞(BRVECs)及糖尿病小鼠视网膜衰老状态的影响。方法对BRVECs进行体外培养和传代,取第7代细胞用于实验。将培养的细胞分为对照组和高糖培养组,分别用含5.5 mmol/L或25.0 mmol/L葡萄糖的M199内皮细胞培养液培养细胞7 d,用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷(X-Gal)染色法观察各组离体细胞中β-半乳糖苷酶的阳性表达情况,计算方法为β-半乳糖苷酶阳性细胞/总细胞×100%。将SPF级810周龄C57BL/6J雄性小鼠12只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,用链脲佐菌素腹腔内注射法制备糖尿病小鼠模型,3个月后取其双眼视网膜平铺于48孔板,采用X-Gal染色法进行染色,光学显微镜下比较两个组小鼠视网膜细胞中β-半乳糖苷酶阳性表达细胞数。结果BRVECs复苏并培养24 h后每孔内细胞70%80%铺满,细胞排列不规则;培养后48 h细胞融合成片,紧密排列。高糖培养组和对照组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例分别为(51.4±5.4)%和(36.6±3.8)%,差异有统计学意义(t=-3.204,P=0.033);糖尿病鼠视网膜中β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数为(94.0±15.1)个/视野,明显多于对照组的(60.0±5.7)个/视野,差异有统计学意义(t=-2.974,P=0.041)。结论高糖环境下离体BRVECs和在体小鼠视网膜细胞中β-半乳糖苷酶表达明显上调,高糖引起的细胞早衰可能参与糖尿病视网膜病变的发生。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院