多聚泛素UBI4低表达对新生隐球菌生长与毒力的功能影响

作者：孟云芳; 周兆婧; 杨雅骊; 赵静宇; 张超; 法振宗; 桑军军; 方伟; 廖万清

来源：中国真菌学杂志, 2015, 10(01): 16-21.

• 新生隐球菌
• 多聚泛素
• 致病机制
• 应激应答。

目的构建新生隐球菌的多聚泛素UBI4低表达菌株,检测UBI4低表达对新生隐球菌生长和毒力的功能影响。方法采用融合PCR方法,扩增含有UBI4基因的片段,将其与含有组蛋白启动子的质粒融合。通过基因枪将重组质粒片段转化入新生隐球菌,应用PCR筛选、DNA序列测序以及实时定量PCR方法对基因重建株进行鉴定与验证。检测多聚泛素UBI4低表达菌株对多种应激耐受力、生长曲线以及对蜡蛾感染的毒力影响。结果成功构建了新生隐球菌多聚泛素UBI4低表达。表型检测结果提示:较之标准株,UBI4低表达株生长速率下降,对高温、H2O2和NO应激以及多种抗真菌药物敏感性显著增强;同时,UBI4下调表达后隐球菌对蜡蛾的毒力显著下调。结论我们的研究初步证实多聚泛素蛋白UBI4对新生隐球菌的生长增殖、应激应答以及感染能力具有重要的调控作用,为后续深入探讨新生隐球菌泛素系统的功能机制奠定基础。

• 单位
  上海市皮肤病医院; 上海长征医院; 中国人民解放军第二军医大学