蛋白激酶R的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

作者：张涛; 罗维玉; 姜水涛; 朱鹏阳; 李呈军; 陈化兰; 孙晓林; 姜丽

来源：甘肃农业大学学报, 2016, (01): 7-12.

DOI：10.13432/j.cnki.jgsau.2016.01.002

• PKR
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体 protein kinase R
• prokaryotic expression
• protein purification
• polyclonal antibody

【目的】构建蛋白激酶R的原核表达系统并制备其多克隆抗体.【方法】利用RT-PCR方法从人的A549细胞中扩增蛋白激酶R(PKR)基因,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经纯化后制备特展异性多克隆抗体.【结果】PKR基因经测序鉴定后转化宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,经终浓度0.5mmol/L IPTG诱导表达GST-PKR融合蛋白,SDS-PAGE分析表明融合蛋白获得稳定表达.表达产物经Glutathione-sepharose 4B亲和层析初步纯化后,用凝血酶切除GST标签,而后经离子交换层析及分子筛在AKTA Explorer上进一步纯化,得到高纯度无标签的PKR蛋白.以纯化后的...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室; 农业部; 甘肃农业大学