TTF-1基因过表达慢病毒重组载体的构建及TTF-1过表达A549细胞系的建立

作者：李长清; 韩育宁; 于亮; 宋旭洋; 马云帆^*

来源：宁夏医学杂志, 2019, 41(02): 97-96.

DOI：10.13621/j.1001-5949.2019.02.0097

• 甲状腺转录因子-1
• 慢病毒
• 肺腺癌
• A549细胞系

目的构建甲状腺转录因子-1(TTF-1)基因过表达慢病毒重组载体并感染人肺腺癌A549细胞株,建立TTF-1基因过表达的A549细胞系,为进一步研究TTF-1在肺腺癌中的作用机制奠定基础。方法采用PCR拼接TTF-1的cDNA寡核苷酸序列,连入pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro,转化至感受态细胞DH-5α,测序鉴定;将携带TTF-1基因的慢病毒过表达载体转染至293T细胞,经包装产生慢病毒,测定病毒滴度,并感染A549细胞,构建稳定表达TTF-1基因的肺腺癌A549细胞系。结果测序结果显示,TTF-1基因过表达慢病毒载体pCDH-CMV-TTF1-EF1-CopGFP-T2A-puro构建成功,测序结果正确;经包装所得病毒上清液滴度为6×107TU/m L,稳定转染的细胞系在荧光显微镜下可见GFP表达; PCR结果显示,A549细胞转染组中TTF-1基因表达量比未转染组提高了381倍。结论成功克隆、扩增TTF-1基因,并建立其慢病毒表达系统,构建了稳定过表达TTF-1基因的人肺腺癌A549细胞系。

• 单位
  临沂市中心医院; 宁夏医科大学总医院