uPA-siRNA重组慢病毒载体感染兔软骨细胞对uPA和MMP-3表达的影响

作者：史晨辉; 王维山; 李长俊; 张振东; 郭风劲; 陈安民

来源：重庆医学, 2014, 43(15): 1892-1895.

DOI：10.3969/j.issn.1671-8348.2014.15.024

• RNA,小分子干扰
• 慢病毒载体
• 软骨细胞
• 尿激酶型纤溶酶原激活物
• 基质金属蛋白酶3

目的靶向特异尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)-siRNA慢病毒表达载体并加载绿色荧光蛋白(GFP)后转染软骨细胞,观察其对软骨细胞表达uPA和基质金属蛋白酶3(MMP-3)的影响。方法培养软骨细胞并根据实验分为实验组(转染uPAsiRNA慢病毒载体)、空载体组(转染空慢病毒载体)、空白对照组(未进行任何处理)和TIMP组(加载MMP特异性抑制剂TIMP)。实验组:uPA-siRNA序列经慢病毒包装并加载GFP,通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞;空载体组:将慢病毒载体通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞;空白对照组正常培养软骨细胞;药物对照组:培养基中加特异性MMP抑制剂。所有细胞培养96h后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)法分别检测软骨细胞uPA mRNA、MMP-3mRNA和蛋白的表达水平。结果慢病毒载体可成功转染到原代软骨细胞中,在感染复数(MOI)为100时转染率达到85%以上。实验组uPA mRNA、uPA蛋白和MMP-3mRNA及MMP-3蛋白的表达水平显著低于空载体组和空白对照组(P<0.01),而与药物干预组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 uPA-siRNA慢病毒载体负载GFP可稳定转染软骨细胞并高效抑制uPA基因、蛋白表达,同时对MMP-3基因、蛋白表达也呈现高效抑制作用。抑制uPA的水平可降低显著MMP-3表达。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 石河子大学