结核分枝杆菌4种新抗原的克隆表达及血清学评价

作者：罗巧; 李霜君; 肖彤洋; 李马超; 刘海灿; 楼永良; 万康林^*

来源：中华流行病学杂志, 2018, 39(04): 514-518.

• 结核分枝杆菌
• 抗原
• 免疫学诊断
• 酶联免疫吸附试验

目的初步评价结核分枝杆菌4种新抗原Rv0432、Rv0674、Rv1566c和Rv1547的血清学诊断价值。方法以结核分枝杆菌实验室标准参照菌株H37Rv全基因组DNA为模板PCR扩增Rv0432、Rv0674、Rv1566c基因的完整序列, Rv1547基因分为两段(Rv1547-1和Rv1547-2)扩增, 与PET-32a表达载体构建重组质粒, 重组蛋白利用亲和层析的方法进行纯化。待检测血清和BL21(DE3)菌体蛋白孵育进行预处理。各重组抗原用ELISA对151份待检血清(41份健康组血清和110份细菌学阳性结核患者组血清)进行IgG抗体检测。检测结果用受试者工作特征曲线对其诊断效能进行分析和评价。采用t检验比较目的蛋白在结核患者组和健康组的差异性。结果成功克隆表达和纯化了蛋白Rv0432、Rv0674、Rv1566c、Rv1547-1和Rv1547-2, ELISA结果显示Rv0432、Rv0674、Rv1566c、Rv1547-1和Rv1547-2的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数和曲线下面积分别为43.64%～92.73%、80.49%～92.68%、0.92～0.94、0.38～0.80、0.363～0.732和0.649～0.915。目的蛋白在结核组检测到的IgG抗体水平均大于健康组(P<0.000 1)。结论结核分枝杆菌新抗原Rv0432、Rv0674、Rv1566c、Rv1547-1和Rv1547-2具有良好的血清学检测价值, 可作为结核病免疫学诊断的候选抗原。

• 单位
  中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 温州医科大学; 生命科学学院; 传染病预防控制国家重点实验室