草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白VP7基因真核表达载体pCI-VP7的构建及鉴定

作者：郝贵杰; 潘晓艺; 姚嘉赟; 徐洋; 尹文林; 沈锦玉

来源：水产学报, 2010, (05): 807-813.

• 草鱼呼肠孤病毒
• 衣壳蛋白
• 转染
• 真核表达 grass carp reovirus
• major capsid protein
• transfection
• eukaryotic expression

将编码草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)主要衣壳蛋白VP70.9kb的基因片段连接至克隆载体pMD19-T中,筛选阳性克隆并测序,经检测为正确序列后,再将目的片段克隆入真核表达载体pCI,筛选得到阳性重组质粒pCI-VP7。然后构建pCI-VP-GFP重组表达质粒(即GFP基因与VP7的一段上游基因融合表达),用PCR及酶切方法鉴定克隆的正确性。并用脂质体法将其转染入真核细胞COS-1和CIK进行瞬时表达,荧光显微镜观察及RT-PCR特异性检测。结果表明,GFP基因与VP7的一段上游基因被成功转染到COS-1和CIK细胞,并得到了很好的表达。进而证明pCI-VP...

• 单位
  浙江省淡水水产研究所