正交试验设计优化小鼠脑组织中氨基酸类神经递质测定的实验研究

作者：陈娟; 王一超; 崔蓉; 刘晓晓; 李园利; 张宝旭

来源：中国卫生检验杂志, 2014, 24(12): 1705-1709.

• 2,4-二硝基氟苯
• 正交试验设计
• 氨基酸类神经递质
• 高效液相色谱

目的用正交试验设计法优化测定小鼠脑组织中氨基酸类神经递质谷氨酸(glutamic acid,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的实验条件,简化实验方法,提高检测方法的灵敏度。方法以2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB)为衍生化试剂柱前衍生,采用正交试验设计法优化样品的衍生化条件。SymmetryC18色谱柱分离,等度洗脱,流动相为30 mmol/L NaAc缓冲液(pH 5.6)∶乙腈(3∶1,v/v),紫外检测波长360 nm,保留时间定性,外标法定量。结果最佳衍生化条件:1%2,4-二硝基氟苯50μl、0.5 mol/L碳酸氢钠100μl、衍生温度85℃、衍生时间30 min。在优化的实验条件下,Glu和GABA在20μg/ml~400μg/ml浓度范围内线性良好,相关系数均为1.0;加标回收率分别为91.5%~98.7%和94.0%~97.7%;Glu的日内和日间精密度分别为2.83%~7.18%和3.10%~8.16%;GABA的日内和日间精密度分别为2.59%~6.00%和2.46%~5.64%。结论该方法简便、准确、灵敏,适用于小鼠脑组织中氨基酸类神经递质的测定。

• 单位
  北京大学; 公共卫生学院