Hif-1α RNA干扰表达载体的构建及鉴定

作者：付士波; 杨英; 王冠军; 何平

来源：吉林大学学报(医学版), 2007, (05): 820-823.

DOI：10.13481/j.1671-587x.2007.05.056

• 乏氧诱导因子-1&alpha
• RNA干扰
• 肿瘤

目的:构建hif-1α基因的RNA干扰表达载体pSilencer3.1-hif-1α,并检测其干扰Hela299细胞hif-1α表达的效率。方法:根据GenBank中hif-1α的mRNA序列,选择设计3对干扰序列,构建sihif-1α重组表达载体,测序正确后经脂质体转染Hela299细胞,Trizol试剂盒一步法提取细胞总RNA,应用RT-PCR检测hif-1α的mRNA的表达;单去污剂裂解法提取细胞总蛋白,Western blotting法检测蛋白表达。结果:测序结果显示,测定序列与设计序列完全相同,表明质粒构建正确。转染3个重组pSilencer3.1-sihif-1α表达载体后24h,Hela299细胞hif-1α的mRNA水平明显降低,对照组hif-1α/GAPDH比值为0.55,转染pSilencer-sihif-1α-1组hif-1α/GAPDH比值为0.13,两组比值比较差异有显著性(P<0.05),转染pSilencer-sihif-1α-2组hif-1α/GAPDH比值为0.33,两组比值比较差异有显著性(P<0.05),转染pSilencer-sihif-1α-3组Hif-1α/GAPDH比值为0.08,两组比值比较差异有显著性(P<0.01);转染3个重组pSilencer3.1-si Hif-1α表达载体后48h,HIF-1α蛋白的表达水平明显降低。结论:成功构建了Hif-1α基因的si RNA真核表达载体,该载体可有效抑制Hela299细胞hif-1α的表达。

• 单位
  吉林大学; 吉林大学第一医院