干扰素-α增强足叶乙甙介导的凋亡和细胞周期停滞

作者：原向伟; 黄秀芳; **羡; 梁胜根; 秦英; 向珊珊; 廖威明

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(02): 300-303.

• 干扰素-α
• 足叶乙甙
• 骨肉瘤
• 细胞周期停滞
• 凋亡

目的探讨干扰素(IFN)-α对足叶乙甙介导骨肉瘤细胞周期停滞和凋亡的影响及其分子机制。方法采用IFN-α和足叶乙甙单独或联合处理骨肉瘤U20S细胞72 h,通过锥虫蓝法测定细胞生长抑制率,应用流式细胞术检测细胞周期停滞,通过Hochest 33258荧光染色检测凋亡,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测P53在mRNA水平的表达,通过小干扰RNA(siRNA)干扰沉默p53的表达,采用Western blot法检测p53和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达。结果药物处理72 h,IFN-α、足叶乙甙和联合用药组细胞生长抑制率为:(2.29±1.03)%、(23.85±3.09)%和(50.51±3.77)%,IFN-α增强足叶乙甙的生长抑制,差异有统计学意义(P=0.008)。在足叶乙甙和联合用药组均出现凋亡形态学改变。足叶乙甙组和联合用药组S期细胞为(19.68±3.62)%和(11.33±2.94)%,G2/M期细胞为(65.02±2.55)%和(76.09±2.87)%,两者组间差异有统计学意义(P=0.037)。IFN-α没有增加足叶乙甙引起的p53在mRNA水平的表达,但沉默p53表达后空白组、对照siRNA组、p53-siRNA组的生长抑制率分别为:(55.72±3.88)%、(51.63±4.36)%和(36.40±3.95)%,p53沉默减弱了联合用药引起的生长抑制,差异有统计学意义(P=0.023),同时联合用药组的PARP裂解明显减弱。泛半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)抑制剂Z-VAD-FMK预处理后Z-VAD-FMK、足叶乙甙组、IFN-α+足叶乙甙组、足叶乙甙+Z-VAD-FMK组和IFN-α+足叶乙甙+Z-VAD-FMK组的生长抑制率为(3.52±1.98)%、(27.11±4.06)%、(56.44±4.78)%、(21.37±3.55)%、(23.81±4.22)%。Z-VAD-FMK减弱联合用药引起的生长抑制,差异有统计学意义(P=0.015),并且联合用药引起的PARP裂解也被减弱。结论 IFN-α在人骨肉瘤U20S细胞中增强足叶乙甙介导的生长抑制、细胞周期停滞和凋亡,该作用依赖p53和Caspase。

• 单位
  中山大学; 中山大学附属第一医院