鲍肠道弧菌YBCH1＿8褐藻胶裂解酶基因val1的表达及酶学性质研究

作者：陈琳; 邵宗泽; 易恩; 杨江科^*; 周梅先^*

来源：生物技术, 2021, 31(02): 121-207.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.02.0018

• 外切型褐藻胶裂解酶
• 海洋弧菌
• 异源表达
• 酶学性质

[目的]对来自羊鲍肠道中弧菌(Vibrio sp. YBCH18)的褐藻胶裂解酶基因val1进行异源表达并研究其酶学性质。[方法]采用PCR技术获得褐藻胶裂解酶基因val1,分析基因序列,构建重组质粒pET-VAL1并在大肠杆菌中实现异源表达,经纯化后对其酶学性质进行研究。[结果]重组酶rVAL1最适温度为30℃;最适pH为8.5,在pH 4.5～10.0范围内保温30 min仍能保持50%以上的相对酶活力;对海藻酸钠具有良好的底物特异性; Mn2+和Co2+对rVAL1酶活具有明显促进作用,而Fe2+、Fe3+、SDS和EDTA对rVAL1活性抑制作用明显; rVAL1动力学参数Km值为2.23 mg/mL,Kcat为3.28 s-1,Vmax为21.70 mg/(mL·min);薄层层析分析显示,VAL1降解终产物主要是单糖组分,推测其属于外切型褐藻胶裂解酶。[结论]成功对褐藻胶裂解酶基因val1进行外源表达,研究发现VAL1是一个PL7家族中具有适冷性的外切型褐藻胶裂解酶,最适条件下比酶活为6.6 U/mg。

• 单位
  自然资源部第三海洋研究所; 武汉轻工大学