优化样品留取方法可提高囊胚培养液中游离DNA整倍性的检测效率

作者：黄锦; 加加林; 党玉姣; 乔杰; 刘平^*

来源：中国生育健康杂志, 2022, 33(04): 301-310.

DOI：10.3969/j.issn.1671-878X.2022.04.001

• 囊胚
• 整倍性
• 无创胚胎染色体整倍性筛查
• 胚胎植入前遗传学筛查
• 游离DNA

目的 探讨利用囊胚培养液中游离DNA检测胚胎整倍性的样品留取优化方案。方法 本研究共纳入239枚囊胚，所有的囊胚均来源于北京大学第三医院生殖中心胚胎植入前遗传学整倍体检测技术(PGT-A)周期。纳入患者的PGT-A指征为女方高龄(>38岁)、复发性流产、反复着床失败。胚胎在D3天更换囊胚培养液，并采取单胚胎单独培养，收集可以PGT-A活检囊胚的培养液。收集方法根据是否胚胎打孔以及胚胎培养时长分为三个阶段。PGT-A囊胚活检的滋养层细胞采用SNP芯片检测整倍性；培养液游离DNA采用二代测序方法(NGS)进行无创胚胎染色体整倍性筛查(NiPGT-A);背靠背比较两者的结果，分析NiPGT-A方法的检出率、NiPGT-A结果与PGT-A结果倍性一致性、整倍体符合率、非整倍体符合率、颗粒细胞污染率等。共有56枚PGT-A整倍性胚胎移植，分析对应胚胎的NiPGT-A结果，统计临床妊娠结局。结果 239枚囊胚中209枚囊胚有NiPGT-A结果，检出率为87.5%。随着采样方法的改进，NiPGT-A结果与PGT-A结果倍性一致性、整倍体符合率逐渐提高；颗粒细胞污染率逐渐降低。239枚胚胎中有56枚PGT-A整倍体的胚胎移植，23枚胚胎的结局为活产/持续妊娠。NiPGT-A没有结果的胚胎妊娠率较高(71.4%),高于NiPGT-A为整倍体或者非整倍体胚胎的临床妊娠结局(33.3%,40.9%)。结论 囊胚培养液的样品留取方法对于NiPGT-A检测至关重要，推荐D3天再次去除颗粒细胞、采集D4-D5/6天囊胚培养液，而且不要针对胚胎进行打孔处理。

• 单位
  北京大学第三医院; 北京大学