氨基酸定点突变提高灵芝蛋白LZ-8热稳定性的研究

作者：孙熙麟; 蒋振彦; 刘志屹; 戴璐; 孙非; 黄伟^*

来源：生物技术通报, 2020, 36(01): 23-28.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0529

• LZ-8
• 热稳定性
• 分子动力学模拟
• 温度因子
• 定点突变

通过氨基酸定点突变技术提高灵芝免疫调节蛋白LZ-8的热稳定性。通过分子动力学模拟结合温度因子预测对LZ-8氨基酸突变位点进行理性设计,在毕赤酵母X33菌株内构建并表达LZ-8突变体蛋白,采用HeLa细胞生长抑制实验和差示量热扫描分析检测并比较了LZ-8突变前后生物学活性及热力学参数。结果显示,LZ-8 N-端α螺旋为理论预测的温度敏感区域,在该区域进行F8W和R9K氨基酸双位点突变,突变后的LZ-8热稳定性提高,相变温度Tm上升0.92℃,相转变焓值ΔH提高23.14 kJ/mol,但突变后LZ-8生物学活性基本不变,LZ-8和LZ-8突变体对HeLa细胞生长抑制的IC50值分别是2.238μg/mL和2.407μg/mL。通过理性设计氨基酸突变位点,获得了稳定性提高但生物学活性不变的灵芝免疫调节蛋白LZ-8的突变体。

• 单位
  吉林大学