稳定表达猪瘟病毒E2蛋白细胞系的建立及其生物活性分析

作者：田宏; 刘湘涛; 吴锦艳; 尚佑军; 郑海学; 代兴国; 孙世琪; 谢庆阁

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2008, (07): 731-733.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.004746

• 猪瘟C株E2基因
• 重组逆转录病毒载体
• PK15细胞
• 基因表达

目的:建立一种能稳定表达猪瘟E2蛋白的真核细胞系,并对E2蛋白的生物活性进行分析。方法:从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFVC-株结构蛋白基因E2,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA方法对表达蛋白的生物活性进行分析。结果:初步检测显示所建立的PK1...

• 单位
  农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所