摘要
旨在研究五味消毒饮不同极性部位的成分及确定对猪细小病毒(PPV)的抑制作用,初步探讨抗病毒的作用机制。采用水煎醇沉法制备五味消毒饮浸膏,石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酸萃取不同极性部位,高效液相色谱法(HPLC)检测不同极性部位的特征图谱;测定对自由基DPPH、ABTS清除能力,比较不同部位抗氧化能力;CCK-8法和细胞病变效应(CPE)观察不同部位对PPV的抑制作用;荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot检测五味消毒饮不同极性部位对PPV诱导自噬和凋亡相关蛋白和mRNA表达的影响。结果:五味消毒饮不同极性部位所含活性成分为绿原酸、咖啡酸、木樨草素、山奈酚,以醇提物、氯仿和乙酸乙酯部位抗氧化能力最强,各极性部位对PPV均有抑制作用,醇提物和氯仿提取物主要成分为绿原酸,可降低Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达抑制PPV诱导的凋亡;醇提物和乙酸乙酯部位主要活性成分为绿原酸和咖啡酸,可通过调节P62、Atg5 mRNA和蛋白表达量抑制自噬。研究结果为五味消毒饮的深度开发和猪细小病毒病防控药物的研制提供了依据。
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单位长江大学; 河南牧业经济学院