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摘要
目的研究左金丸对IEC6、HCT116细胞共培养模型肠上皮屏障功能的影响，并初步探讨其作用机制。方法采用左金丸醇提物低、中、高剂量(5、10、20μg·mL~(-1))处理HCT116、IEC6细胞，采用MTT法检测细胞增殖情况。通过体外构建IEC6、HCT116细胞共培养体系模拟结肠癌微环境，以左金丸(5、10、20μg·mL~(-1))进行干预；检测IEC6细胞跨膜电阻(TEER)值及细胞通透性；采用高效液相色谱(HPLC)法检测HCT116、IEC6细胞多胺含量；微量法检测HCT116细胞的葡萄糖消耗量、乳酸浓度和ATP含量；WesternBlot法检测IEC6细胞Zonulaoccluden1(ZO-1)、Occludin蛋白和HCT116细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)、精眯/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)、鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)、SLC22A1、缺氧诱导因子1(HIF1α)、C-Myc、己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、乳酸脱氢酶(LDHA)蛋白表达情况。结果（1）与对照组比较，左金丸低、中、高剂量(5、10、20μg·mL~(-1))处理HCT116细胞24、48、72h后，细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01)；左金丸低、中、高剂量(5、10、20μg·mL~(-1))处理IEC6细胞24h后，细胞增殖抑制率无明显变化(P>0.05)。（2）与IEC6细胞单培养组比较，共培养模型组细胞的TEER及FD_(4)荧光强度显著降低(P<0.01)；紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达量显著降低(P<0.01)；IEC6细胞的多胺含量显著降低(P<0.01)，HCT116细胞的多胺含量显著增加(P<0.01)。与共培养模型组比较，左金丸中、高剂量组细胞的TEER及FD_(4)荧光强度显著升高(P<0.01)；左金丸高剂量组IEC6细胞ZO-1、Occludin蛋白表达明显上调(P<0.05，P<0.01)；左金丸低、中、高剂量组的IEC6细胞多胺含量显著增加(P<0.01)，而左金丸中、高剂量组HCT116细胞的多胺含量显著降低(P<0.01)。（3）与对照组比较，左金丸能明显下调HCT116细胞多胺合成酶ODC、多胺转运体SLC22A1蛋白的表达(P<0.05，P<0.01)，明显上调SSAT、OAZ1蛋白表达(P<0.05，P<0.01)；能够明显抑制HCT116细胞的葡萄糖消耗量、乳酸生产量及ATP含量(P<0.05，P<0.01)；明显下调糖酵解通路HIF1α、C-Myc、HK2、PKM2、PDK1、GLUT1、LDHA蛋白表达(P<0.05，P<0.01)。结论左金丸对IEC6、HCT116细胞共培养模型肠上皮屏障功能具有保护作用，对HCT116细胞具有增殖抑制作用，可能与其调节结肠癌HCT116细胞多胺代谢、转运以及抑制肿瘤糖酵解水平有关。
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