嵌合泛素连接酶TrCP-CC及其突变体△F-CC重组腺病毒的构建及鉴定

作者：罗红伟; 袁颖; 季茂胜; 刘钉宾; 王晓飞; 曹唯希; 冯文莉

来源：中国生物制品学杂志, 2010, (06): 561-565.

• &beta
• -TrCP
• 突变
• 腺病毒科
• 泛素蛋白连接酶类 &beta
• -TrCP
• Mutation
• Adenoviridae
• Ubiquitin protein ligases

目的构建嵌合泛素连接酶TrCP-CC及其突变体△F-CC的重组腺病毒,并检测其表达。方法采用PCR和重叠PCR法构建真核表达质粒Migr1-TrCP-CC-HA和Migr1-△F-CC-HA,以此为模板,通过PCR将其克隆至穿梭质粒pAd-Track-CMV,构建重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-TrCP-CC和pAdTrack-△F-CC,再与骨架载体pAdeasy-1经同源重组得到重组腺病毒质粒pAd-TrCP-CC和pAd-△F-CC,转染HEK293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Ad-TrCP-CC和Ad-△F-CC,测定其滴度,并经RT-PCR检测目的基因的转录水平。结果经酶切和...

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆医科大学