PCV3河南株Cap基因的克隆、测序及其在大肠杆菌中的表达

作者：郭奎; 徐朋丽; 赵宇; 郑慧华; 杨明凡; 陈红英^*

来源：中国兽医学报, 2018, 38(11): 2063-2067.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.11.06

• 猪圆环病毒3型
• 克隆
• Cap蛋白
• 表达

为研究猪圆环病毒3型(PCV3)Cap基因在大肠杆菌中的表达产物是否具有免疫原性,根据GenBank中发表的PCV3基因组序列,设计1对特异性引物,PCR扩增PCV3 Cap基因,克隆到pMD18-T载体。测序结果表明获得了Cap基因,其大小为543bp。并将Cap亚克隆到原核表达载体pET-28a中,再转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,获得重组菌株。获得的重组菌37℃、0.6mmol/L IPTG诱导6h,进行SDS-PAGE及Western blot分析。重组菌破碎后从沉淀中获取1条约24 600的新蛋白带,可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性反应。有研究表明PCV3与PCV2不具有免疫交叉保护作用,因此本试验表达的具有良好的抗原性PCV3 Cap蛋白,为PCV3新型亚单位疫苗和ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。

• 单位
  河南农业大学; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所