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摘要
【目的】克隆猪的Microrchidia家族CW锌指蛋白2(Microrchidia family CW-type zinc finger 2,MORC2)基因，利用生物信息学手段分析其序列特征，并检测MORC2基因在猪不同组织中的表达情况和卵巢中的定位。【方法】以猪卵巢cDNA为模板扩增和克隆MORC2基因完整CDS区，并进行相似性比对及系统发育树构建；利用生物信息学软件对猪MORC2蛋白序列进行预测；使用实时荧光定量PCR检测MORC2基因在猪不同组织中的表达情况；利用免疫组化方法检测猪MORC2蛋白在猪卵巢中的定位情况。【结果】猪MORC2基因CDS区序列全长3 102 bp,编码1 033个氨基酸。猪MORC2蛋白氨基酸序列与人、黑猩猩、恒河猴、小鼠、牛、绵羊、鸡和斑马鱼的相似性分别为94.8%、94.6%、94.9%、91.9%、93.8%、93.9%、80.8%和64.3%。系统进化树表明，猪与灵长类亲缘关系最近，与反刍动物和啮齿类次之，与斑马鱼(鱼类)亲缘关系最远。猪MORC2蛋白分子质量为117.44 ku,理论等电点为8.16,半衰期为30 h,属于不稳定蛋白。MORC2蛋白的平均疏水性为―0.736,为亲水性蛋白，不含跨膜结构和信号肽。猪MORC2蛋白有174个磷酸化位点、81个糖基化位点；亚细胞定位属于核蛋白，细胞质次之，线粒体中有少量表达；含有经典的MORC蛋白家族结构：GHKL-ATPase、zf-CW和CC结构域。组织表达谱结果显示，MORC2基因在猪各组织中广泛表达，其中在肝脏中表达量最多，显著高于其他组织(P<0.05),在心脏、肺脏和肌肉中表达量较少，显著低于其他组织(P<0.05)。免疫组化结果显示，MORC2蛋白在健康猪卵泡颗粒细胞和膜细胞中均有表达且表达量较高，在闭锁的卵泡颗粒细胞和膜细胞中表达量较少。【结论】试验成功获得猪MORC2基因完整CDS区序列，该基因在猪各组织中广泛表达，MORC2蛋白主要在健康猪的卵泡颗粒细胞和膜细胞中表达。研究结果为进一步研究MORC2蛋白调控猪卵巢发育和卵泡闭锁的分子机制提供理论依据。
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