摘要
[目的]探索南极假丝酵母脂肪酶B更加经济、简便的固定化方法.[方法]根据南极假丝酵母脂肪酶B的成熟多肽序列,人工合成calb基因.将其克隆到质粒pYD1中的AGA2基因下游,获得的重组质粒pYD1-CALB,转化S.cerevisiae EBY100菌株,并利用酿酒酵母工业化培养基发酵.[结果]成功构建表面展示CALB的酵母工程菌株;重组菌株连续传代10次表达酶活力基本保持不变,具有良好的遗传学稳定性;经工业化培养基发酵优化后,25 ℃发酵48 h,CALB水解活力可达4.25 U/ml,冻干粉活力可达147.82 U/g 干细胞.[结论]利用酿酒酵母表面展示系统固定化南极假丝酵母脂肪酶B具有可行性,且工业化培养基的使用降低了发酵成本.
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