丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式激活蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作者：洪源; 兰孟东; 王琦; 张黎颖; 刘秀财; 李晓光; 郝晓花; 成军

来源：中华传染病杂志, 2009, 27(4): 217-220.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.04.006

• 反式激活因子类
• 基因表达
• 抗体
• 免疫组织化学
• 肝炎病毒

目的 对HCV非结构蛋白2反式激活蛋白(NS2TP)进行原核表达,制备多克隆抗体,并探讨其在不同肝组织中的表达情况.方法 PCR法获得HCV NS2TP基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)上,并转化入E.coli BL21.在大肠埃希菌中诱导表达,表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,经免疫印迹分析验证后,大量表达并纯化该重组蛋白.将重组蛋白免疫家兔后获取多克降抗体,应用免疫组织化学技术检测健康人及慢性HCV患者的肝组织.结果 成功获得丁重组目的 蛋白(相对分子质量为33×103)及高滴度、高特异度的多克隆抗体.慢性HCV患者肝组织内NS2TP的表达高于健康肝组织,且以细胞核内分布为主.结论 明确了慢性HCV患者肝组织内NS2TP表达量及细胞内定位的变化,为进一步研究NS2TP的生物学功能和HCV的致病机制奠定了基础.

• 单位
  北京地坛医院