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摘要
旨在通过脂多糖(LPS)诱导牦牛瘤胃上皮细胞建立炎症模型，考察瘤胃上皮细胞作为非免疫细胞是否存在细胞内补体C3激活，及其对细胞三磷酸腺苷(ATP)生成的影响，为瘤胃健康营养调控技术提供试验依据。用不同浓度的LPS处理牦牛瘤胃上皮细胞系，采用CCK-8法测定细胞活力；ELISA试剂盒测定细胞内补体C3激活产物C3a、C3b浓度以及培养基中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度；化学法检测细胞内ATP浓度，线粒体红色荧光探针和流式细胞仪检测线粒体数量及膜电位；qPCR检测细胞IL-1β、IL-6、TNF-α,补体C3及其激活关键酶组织蛋白酶B(CTSB)和组织蛋白酶L(CTSL),以及ATP合成酶亚基(ATP5A和ATP5C1)等基因相对表达量。结果发现：1)不同浓度LPS处理后，牦牛瘤胃上皮细胞活力极显著下调(P<0.01),TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子的基因表达量和浓度极显著上调(P<0.01),在LPS浓度为10μg·mL-1时，牦牛瘤胃上皮细胞炎症模型构建成功；2)炎症下，牦牛瘤胃上皮细胞内补体C3及其激活关键酶CTSB的基因表达量极显著升高(P<0.01),激活产物补体片段C3a和C3b浓度极显著升高(P<0.01);3)炎症下，牦牛瘤胃上皮细胞ATP含量极显著下降(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.05),ATP合成酶亚基ATP5A和ATP5C1的基因表达量随着LPS处理浓度升高显著下调(P<0.01)。综上，利用LPS诱导建立了牦牛瘤胃上皮细胞炎症模型。在LPS刺激下，牦牛瘤胃上皮细胞可发生细胞内补体C3激活过程，并抑制线粒体ATP合成酶亚基ATP5A、ATP5C1和有氧呼吸关键酶ME1的基因表达，线粒体膜电位降低，抑制ATP生成。因此，LPS诱导炎症可抑制瘤胃上皮细胞ATP生成，从而导致瘤胃健康问题。
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