子宫颈癌组织中环状RNA的表达谱及功能分析

作者：郭依琳; 王璐; 徐臻^*; 王武亮; 赵虎; 王倩

来源：中华妇产科杂志, 2022, 57(12).

目的探究子宫颈癌组织中环状RNA(circRNA)的表达谱, 并对差异表达的circRNA进行功能分析。方法收集2021年2月至8月在郑州大学第二附属医院经病理检查确诊的15例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织标本。(1)采用circRNA高通量测序技术分析其中5例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中circRNA的表达谱差异;对显著差异表达circRNA的亲本基因作基因本体(GO)功能注释及京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。(2)将本研究中circRNA高通量测序并筛选出的差异表达circRNA与从美国国家生物技术信息中心(NCBI)基因表达综合(GEO)数据库下载的基因表达谱GSE102686数据集中筛选出的差异表达circRNA取交集, 选择差异倍数最高的3个显著下调和3个显著上调共6个circRNA, 即hsacirc0079480、hsacirc0005480、hsacirc0003162和hsacirc0084927、hsacirc0002151、hsacirc0001849, 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证15例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中6个差异表达circRNA的表达。(3)选择6个差异表达circRNA中经过qRT-PCR技术验证的在子宫颈癌组织及其癌旁组织中表达水平有显著差异(P<0.05)的circRNA进行下一步的功能研究(共有3个差异表达circRNA, 即hsacirc0005480、hsacirc0003162和hsacirc0084927), 构建小分子干扰RNA(siRNA), 转染子宫颈癌细胞系SiHa和HeLa细胞以敲低其表达, 实验分为4组, 即hsacirc0005480敲低组、hsacirc0003162敲低组、hsacirc0084927敲低组和阴性对照(NC)组, 采用活细胞计数(CCK-8)法检测4组SiHa和HeLa细胞的增殖能力。(4)通过Starbase、CircInteractome等数据库预测能够与hsacirc0005480、hsacirc0003162和hsacirc0084927结合的微小RNA(miRNA), 构建竞争性内源性RNA(ceRNA)网络, 即circRNA-miRNA网络。结果 (1)高通量测序结果显示, 5例子宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织中共检测到26 280个circRNA, 有1 421个差异表达的circRNA, 其中表达上调774个, 表达下调647个。GO功能注释及KEGG信号通路富集分析显示, 差异表达circRNA主要富集于血管内皮生长因子(VEGF)、恶性肿瘤中的miRNA、铂类药物耐药性等信号通路。(2)qRT-PCR技术检测显示, hsacirc0005480(分别为0.54±0.31、1.03±0.27;t=4.647, P<0.001)和hsacirc0003162(分别为0.48±0.45、1.24±0.81;t=3.172, P=0.004)在子宫颈癌组织中的表达水平显著低于其癌旁组织, 而hsacirc0084927在子宫颈癌组织中的表达水平显著高于其癌旁组织(分别为2.34±0.90、1.11±0.54;t=-4.507, P<0.001)。(3)与NC组细胞(包括SiHa和HeLa细胞)相比, hsacirc0005480敲低组细胞的增殖能力显著增强, 而hsacirc0003162敲低组和hsacirc0084927敲低组细胞的增殖能力显著减弱(P均<0.01)。(4)ceRNA网络的构建结果:hsacirc0005480可与hsa-miR-224-3p、hsa-miR-522-3p等8个miRNA相互作用;hsacirc0003162可与hsa-miR-485-3p、hsa-miR-1243和hsa-miR-1279相互作用;hsacirc0084927可与hsa-miR-874-3p、hsa-miR-367-5p等9个miRNA相互作用。结论本研究初步阐明了子宫颈癌组织中circRNA的表达谱, 对差异表达的circRNA进行验证和功能研究, 并构建ceRNA网络, 为研究子宫颈癌的发生、发展及治疗靶点提供依据。

• 单位
  郑州大学第二附属医院