天蚕素AD和BuforinⅡ表达载体的改良和融合蛋白表达条件优化

作者：陈泉; 扈进冬; 赵晓燕; 李哲; 李纪顺; 杨合同

来源：福建农业学报, 2013, (12): 1195-1199.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2013.12.001

• 大肠杆菌
• 天蚕素AD
• Buforin Ⅱ
• 蛋白表达 E.coli
• cecropin AD
• buforin Ⅱ
• protein expression

为提高重组大肠杆菌表达天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白的表达效率,研究表达菌株、质粒稳定性和诱导条件对天蚕素AD和BuforinⅡ融合蛋白表达的影响。通过SDS-PAGE分析目的蛋白占全菌总蛋白的含量,确定大肠杆菌BER2566为表达菌株;利用基因工程技术,构建卡那霉素抗性的表达质粒pET(K)-Trx-CADBuforinII,提高质粒稳定性和蛋白表达效率;优化了IPTG浓度、诱导时机和诱导时间等诱导条件,确定菌体浓度为OD600=0.8时,IPTG浓度为0.8mmol·L-1,诱导时间为5h,目的蛋白表达量最高,可达到全菌总蛋白含量的50%以上。

• 单位
  山东省科学院中日友好生物技术研究中心