大鼠视网膜神经节细胞存活和突起生长与可溶性混合晶状体蛋白的促进作用:体外培养实验

作者：刘康; 王一; 牛建军; 王艳华; 曾玉晓

来源：中国临床康复, 2005, (22): 116-118+291.

• 晶体蛋白类
• 视网膜神经节细胞
• 细胞培养

目的:观察不同培养基中血清和混合晶状体蛋白对视网膜神经节细胞的影响,探讨晶状体损伤后其促进视网膜神经节细胞存活和再生的作用。方法:实验于2004-04/07在解放军第三军医大学西南眼科医院眼科实验室完成。选择成年LongEvens大鼠8只用于可溶性混合晶状体蛋白的提取;选择新生0～2dLongEvens大鼠30只用于视网膜神经节细胞的培养。分别用下列3组培养基对离体视网膜神经节细胞进行培养:①100mL/L新生牛血清+900mL/LDMEM/F12培养基(新生牛血清+DMEM/F12组)。②100mL/L新生牛血清+100mL/L胎牛血清+800mL/LDMEM/F12培养基(新生牛血清+胎牛血清+DMEM/F12组)。③100mL/L胎牛血清+900mL/LDMEM/F12培养基(胎牛血清+DMEM/F12组)。每组又分为6个亚组,其中5个亚组分别加入5种不同终浓度的可溶性混合晶状体蛋白(1,0.5,0.02,0.01,0.005mg/L)溶液,一个亚组不加可溶性混合晶状体蛋白液。每天在倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,记录存活细胞数和存活时间。培养2,4,6d后,计数每视野分散的、有突起生长的视网膜神经节细胞数和最长突起长度(每一视野随机取5个细胞进行测量,共30个视野,150个突起)应用LeicaQWin图像分析系统。结果:①视网膜神经节细胞存活时间:新生牛血清+DMEM/F12组培养细胞能存活六七天,新生牛血清+胎牛血清+DMEM/F12组和胎牛血清+DMEM/F12组培养细胞能存活七八天。②有突起生长的视网膜神经节细胞数目和最长突起长度:在相同培养天数(2,4,6d)和条件下(加入同一终浓度晶状体蛋白)新生牛血清+胎牛血清+DMEM/F12组细胞数目均多于新生牛血清+DMEM/F12组犤加入0.5mg/L晶状体蛋白,2d时(3.83±4.53比0.14±0.38)个/视野,(4d时14.7±9.62比2.5±3.89)个/视野,P<0.01;6d时(20.13±12.32比5.43±5.62)个/视野,P<0.05犦;在4d内胎牛血清+DMEM/F12组细胞突起长度明显优于新生牛血清+胎牛血清+DMEM/F12组(P<0.01);加入混合晶状体蛋白后细胞存活时间及突起长度明显长于未加晶状体蛋白组,晶状体蛋白液含量为0.01mg/L时,作用较明显。结论:加入晶状体蛋白液和不同血清的培养基两因素间无交互作用,分别独立地发挥作用。可溶性混合晶状体蛋白可以促进体外培养的视网膜神经节细胞存活和突起生长。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学