摘要
探索HIV P55-gag蛋白对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)老化的影响,进一步阐明HIV P55-gag蛋白抑制BMSC成骨分化的机理。原代分离、培养、纯化BMSC,再将其分两组进行处理,一组为常规培养对照组(BMSCcon),另一组为添加HIV P55-gag蛋白培养组(BMSCgag);通过计算培养5、10、15及20天的BMSCcon和BMSCgag的群体倍增水平,比较增殖能力;将培养20天的BMSCcon和BMSCgag分别标记Brdu,免疫荧光法检测Brdu掺入率,比较两组细胞的增殖水平;通过检测细胞衰老生物标记β-半乳糖苷酶,比较两组细胞的衰老程度;Western检测两组细胞衰老相关蛋白P21的表达强度;将两组细胞诱导成骨分化,比较其成骨分化能力。在培养15天和20天时,BMSCgag群体倍增水平明显低于BMSCcon;BMSCgag的Brdu掺入率明显低于BMSCcon,分别为(26±4.1)%和(45±3.7)%;β-半乳糖苷酶染色检测显示,BMSCgag的衰老细胞数明显多于BMSCcon,分别为(21±4.7)%和(8±2.1)%;BMSCgag的P21的表达强度明显强于BMSCcon;成骨诱导后,茜素红染色和ALP染色均显示,BMSCgag的成骨分化能力明显弱于BMSCcon。HIV P55-gag蛋白促进BMSC老化,进而抑制其成骨分化能力。
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单位生物工程学院; 北京工业大学; 湖北医药学院附属太和医院