薯蓣皂苷元通过自噬降解Tau蛋白发挥神经保护作用

作者：张瑜; 伊力亚斯·艾萨; 雷秀英; 陈倩; 西仁阿依·西热甫; 冯学召; 席庆; 袁芳^*

来源：中国临床药理学杂志, 2021, 37(17): 2290-2294.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2021.17.011

• 薯蓣皂苷元
• 自噬
• 阿尔茨海默病
• 微管相关蛋白
• 强力霉素

目的研究小分子药物薯蓣皂苷元(DG)降解Tau蛋白的作用机制。方法 (1)将SH-SY5Y细胞分组为6组:对照组和5个浓度(5,10,15,20,25μg·mL-1)DG组,用DG处理24 h, MTT方法和平板克隆形成实验检测DG的毒性作用,依据毒性结果选择15μg·mL-1 DG进行以下实验。(2)用15μg·mL-1 DG组处理稳定表达GFP-LC3的NRK细胞12 h,激光共聚焦显微镜检测对照组、饥饿组、雷帕霉素组和DG组的自噬体数目,饥饿组为阳性1组。蛋白质印迹法检测对照组、雷帕霉素组、DG组的选择性自噬接头蛋白(p62)和微管相关蛋白轻链3(LC3)-II蛋白量,雷帕霉素组为阳性2组。(3)稳定表达Tau-GFP蛋白的HEK293细胞分为4组:对照组、强力霉素组(200 ng·mL-1 DOX)、联合1组(200 ng·mL-1 DOX+15μg·mL-1DG)和联合2组(DOX+DG+氯喹10 nmoL),强力霉素组为模型组,通过激光共聚焦显微镜检测各组Tau-GFP蛋白荧光强度,蛋白质印迹法检测Tau-GFP和LC3-II蛋白表达。结果 (1)对照组和由低到高5个浓度DG组细胞存活率分别为(100.00±1.31)%,(102.25±0.62)%,(101.14±0.20)%,(103.32±1.40)%,(100.32±0.15)%和(100.36±2.98)%,DG各组与对照组比较无明显差异。15μg·mL-1 DG组对SH-SY5Y细胞活力没有影响。(2)稳定表达GFP-LC3的NRK细胞中,对照组、阳性1组和DG组自噬体数目为1.00±0.00,4.33±0.58和6.33±0.58。NRK细胞中,对照组、阳性2组、DG组p62蛋白相对表达量为0.97±0.03,0.39±0.03和0.60±0.05;LC3-II蛋白相对表达量为0.65±0.04,1.06±0.11和1.11±0.11。SH-SY5Y细胞中,对照组、阳性2组、DG组的p62蛋白相对表达量为1.47±0.22,0.91±0.10和0.85±0.05;LC3-II蛋白相对表达量为0.73±0.09,0.93±0.35和1.30±0.25。(3)HEK293细胞中,对照组、模型组、联合1组、联合2组中Tau-GFP蛋白相对表达量为0.66±0.28,1.58±0.06,1.18±0.12和1.63±0.15;LC3-II蛋白相对表达量为0.38±0.05,0.53±0.05,0.70±0.02和1.50±0.13。上述指标:对照组与DG组比较或与模型组比较,或对照组与联合1组比较或与联合2组比较,联合1组与模型组比较或与联合2组比较。差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 DG能够降解Tau蛋白,进而发挥神经保护作用,其机制或许是通过诱导细胞发生自噬达成的。

• 单位
  基础医学院; 新疆医科大学