耐热性α-半乳糖苷酶突变体的筛选及酶学性质研究

作者：马焕; 张秀江; 胡虹; 冯菲; 解复红; 向凌云; 武艳芳; 刁文涛^*

来源：饲料研究, 2023, 46(09): 80-84.

DOI：10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.09.017

• α-半乳糖苷酶
• 耐温性
• 重组质粒pGAPZαA-Gal27A
• 保留酶活比
• 酶学性质

研究旨在改造株链球菌来源的α-半乳糖苷酶基因Gal27A，获得耐热性高的突变体。在常规PCR体系中加入不同水平的MnCl2，将基因克隆至载体pGAPZαA并成功构建表达酶产物的重组质粒pGAPZαA-Gal27A。将线性化的重组质粒电转至毕赤酵母GS115，在含有100 g/L博来霉素的YPDS平板上筛选耐热性提高的突变体，通过pNPG的方法测定重组酶的酶学性质为最适温度65℃，最适pH值6.5,Ag2+、Hg2+对重组酶的酶学活性具有明显的抑制作用，Cu2+对重组酶的酶活性具有促进作用。研究表明，试验成功构建耐热α-半乳糖苷酶高效表达菌株29和54，在55℃保温10 min与同等条件下的野生型进行对比，加热前后的保留酶活比的增幅大于45%。

• 单位
  河南省科学院生物研究所有限责任公司; 棕榈生态城镇发展股份有限公司