突触蛋白-I反义寡核苷酸对胚胎干细胞移植治疗脑缺血的影响

作者：梁燕玲; 张苏明; 孟宪芳; 常丽英; 黎逢光; 鲁文果

来源：第九次全国神经病学学术大会, 中国广东广州, 2006-09-01.

• 干细胞
• 胚胎
• 突触蛋白
• 脑缺血
• transwell

目的:探讨突触蛋白-I的表达水平对胚胎干细胞在移植治疗脑缺血中迁移能力的影响,寻求胚胎干细胞移植治疗脑缺血过程中的可调控点或调控切入点。方法:采用transwell小室共培养胚胎干细胞和遭受缺血缺氧打击的已分化的 PC12细胞,模拟胚胎干细胞移植迁移的过程,建立胚胎干细胞移植治疗脑缺血的离体模型。采用Hoechst染色法和流式细胞仪计算胚胎干细胞的迁移率,比较分化与未分化胚胎干细胞的迁移能力、受缺血缺氧打击与未受缺血缺氧打击PC12细胞对胚胎干细胞的吸引力;然后采用反义寡核苷酸技术抑制胚胎干细胞的synapsin-I表达,观察抑制后胚胎干细胞迁移能力和形态学的改变。结果:胚胎干细胞可穿过transwell微孔滤膜迁移向PC12细胞。未分化胚胎干细胞迁移后仍倾向于集落样生长,未见有分化样形态学改变,已分化胚胎干细胞迁移后细胞之间仍能形成突触联系,部分能与PC12细胞形成突触联系。已分化胚胎干细胞的迁移细胞数量明显少于未分化胚胎干细胞。遭受缺氧缺血打击后的PC12细胞比未遭受缺氧缺血打击的PC12细胞更能吸引胚胎干细胞的迁移,迁移向缺血PC12细胞的胚胎干细胞比迁移向未缺血的PC12细胞增多 68％以上甚至数倍。转染synapsin-I反义寡核苷酸后胚胎干细胞的迁移能力均明显下降,Hoechst染色计数显示转染后未分化和已分化的胚胎干细胞的迁移数为90．5±6．9/视野和51．3±6．4,较转染前(90．5±6．9/视野和51．3±6．4/视野)下降了55％和 45％(P<0．05);流式细胞仪计数显示转染后未分化和已分化ESC的迁移细胞数为379±12／10000个细胞和356±10／10000个细胞,较转染前(528±12／10000个细胞和526±10／10000个细胞)减少了28％和32％(P<0．05)。结论:在胚胎干细胞移植治疗脑缺血的离体研究中、胚胎干细胞的迁移数受宿主细胞内环境的影响,并可能与胚胎干细胞自身的synapsin-I的表达水平有关;synapsin-I可能参与了胚胎干细胞移植治疗脑缺血过程的调控机制,有望成为这一过程的理想调控点或调控切入点; transwell共培养体系可能成为体外建立干细胞迁移、分化模型的实用新型的工具。

• 单位
  同济医院; 华中科技大学同济医学院; 神经内科