汉逊酵母活性及活力荧光素二乙酸酯-碘化丙啶双荧光染色检测方法的建立及应用

作者：王玢; 徐世友; 杨俊杰; 周晖国^*; 雷清^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(11): 1347-1352.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.004024

• 汉逊酵母
• 荧光素二乙酸酯
• 碘化丙啶
• 荧光染色
• 活性
• 活力

目的 建立用于检测汉逊酵母活性和活力的荧光素二乙酸酯(carboxyfluorescein diacetate,CFDA)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光染色法。方法 通过单因素试验，优化CFDA的染色时间(5、10、20、40、60、120 min)、工作液浓度(50、100、200、300μmol/L)及PI的染色时间(5、10、15、20、25 min)、工作液浓度(2、10、20、30μmol/L)。采用最适条件检测理论存活率为0、25%、50%、75%和100%的汉逊酵母样品，荧光显微镜下观察荧光信号，ImageJ软件分析灰度值；计数存活及死亡细胞个数，计算实际存活率和实际死亡率。同时分析实际灰度值、实际存活率及实际死亡率与相应理论值的相关性。采用建立的CFDA-PI双荧光染色法检测3批汉逊酵母培养物的活性及活力。结果CFDA和PI的最佳染色时间为60和5 min，最佳工作液浓度为200和2μmol/L。不同理论存活率汉逊酵母样品的实际灰度值、实际存活率及实际死亡率与相应理论值均具有显著相关性(R2=0.998 3～0.999 2,P <0.05)。3批汉逊酵母培养物活性及活力3次检测值的CV分别为3.20%～4.03%和1.10%～2.27%。结论 成功建立了用于检测汉逊酵母活性和活力的CFDA-PI双荧光染色法，可用于相关研究中汉逊酵母活性和活力的快速检测。

• 单位
  兰州生物制品研究所有限责任公司