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摘要
目的:进一步优化固相微萃取和高效液相色谱(SPE-HPLC)结合测定川乌炮制品中6个乌头类生物碱的方法。进行口服制川乌炮制品提取物后肺和肾的病理切片分析,确定川乌炮制的最适方法和时间。方法:采用强阳离子吸附树脂MCX固相萃取小柱对川乌炮制品进行纯化,高效液相色谱法测定,流动相为0.01 mol·L–1甲酸铵水溶液(甲酸0.1%)-乙腈(32%四氢呋喃),梯度洗脱,流速为1.0mL·min–1,检测波长为235 nm。HE染色观察大鼠口服川乌炮制品提取物后肺、肾组织的形态学变化。结果:6个乌头类生物碱在优化条件下均可有效分离,苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱分别在各自线性范围内呈良好的线性关系,加样回收率在98.1%～104.0%之间,RSD均<5.0%。川乌炮制时采用蒸制法,在7 h时,单酯型生物碱总量达到最大。HE染色观察大鼠口服川乌炮制品提取物后肺、肾组织的形态产生变化。肺泡间质水肿导致弥漫性变化,大量炎性细胞浸润,肺泡壁增厚。肾小球体积增大,球内细胞核相对减少,肾小球与肾小囊间距变小,管腔之间无空隙,且管腔变大。结论:本实验采用强阳离子交换树脂MCX和高效液相色谱法结合,测定川乌炮制品中乌头类生物碱动态变化,确定川乌最适炮制方法为蒸制法,时间为7 h,方法操作简便,时间短,测定结果准确,可为控制川乌中毒性成分和有效成分的含量提供科学依据。
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