介导人α-反义寡核苷酸慢病毒载体的构建

作者：赖颖晖; 赖永榕; 杨高晖

来源：中国实验诊断学, 2010, (09): 1358-1362.

• 慢病毒载体
• 反义寡核苷酸
• 基因治疗 Lentiviral vector
• Antisense oligonucleotide
• Gene therapy

目的构建介导人α-反义寡核苷酸的慢病毒载体,为α-反义寡核苷酸对β-地中海贫血基因治疗的体内试验提供稳定的转染细胞载体。方法根据人α-反义寡核苷酸序列设计siRNA、合成DNA片段,通过双限制性内切酶消化和连接的方法构建pGCSIL-vshRNA-GFP载体质粒,接着该质粒转化感受态的大肠杆菌E.coliDH5α,通过PCR及基因测序鉴定阳性克隆,再经Lipofectamine 2000将pGCSIL-vshRNA-GFP,pHelper 1.0和pHelper 2.0三质粒系统共转染293 T细胞包装病毒,通过绿色荧光蛋白的表达测定收集的病毒滴度。结果重组质粒的外源基因PCR鉴定正确,基因测...

• 单位
  广西医科大学第一附属医院