circTNPO1通过下调miR－338－3p的表达促进骨肉瘤增殖迁移

作者：陆建红; 黄晓文; 张国强^*; 马彦; 陈君鑫

来源：中华肿瘤杂志, 2022, 44(09): 968-974.

• 骨肉瘤
• circTNPO1
• miR－338－3p
• 细胞增殖
• 细胞迁移

目的探讨circTNPO1通过下调miR-338-3p的表达促进骨肉瘤细胞增殖迁移的作用及其分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中circTNPO1、miR-338-3p、Ki-67和Vimentin的表达水平。构建circTNPO1稳定敲降的143B细胞系, 细胞计数试剂盒8实验与细胞划痕实验检测细胞增殖迁移能力, 荧光素酶报告基因实验验证circTNPO1与miR-338-3p的关系。建立裸鼠sh-circTNPO1 143B细胞皮下成瘤模型, 瘤内注射miR-338-3p抑制剂与miR阴性对照, 观察肿瘤重量与体积的变化。免疫组化法检测肿瘤组织中Ki-67的表达。结果骨肉瘤细胞系U2OS、HOS、MG63、143B、ZOS和ZOSM中circTNPO1 mRNA表达水平分别为2.73±0.27、3.18±0.54、4.33±0.52、5.75±0.65、4.50±0.49和3.96±0.35, 均高于成骨细胞hFOB1.19(1.00±0.09, 均P<0.05)。培养48和72 h后, sh-circTNPO1#1组143B细胞吸光度(A)值分别为0.81±0.05和1.09±0.06, sh-circTNPO1#2组143B细胞A值分别为0.84±0.04和1.2±0.04, 均低于对照组(1.00±0.06和1.49±0.06, 均P<0.05)。转染48和72 h时, sh-circTNPO1#1+miR-338-3p抑制剂组143B细胞A值分别为0.92±0.06和1.32±0.07, 均高于sh-circTNPO1#1+miR阴性对照组(分别为0.82±0.04和1.07±0.08, 均P<0.05)。细胞划痕实验显示, sh-circTNPO1#1组和sh-circTNPO1#2组143B细胞迁移率分别为(24.43±2.15)%和(39.70±4.20)%, 均低于对照组[(56.51±3.27)%, 均P<0.05]。sh-circTNPO1#1+miR-338-3p抑制剂组143B细胞迁移率[(46.10±5.71)%]高于sh-circTNPO1#1+miR阴性对照组[(26.70±2.21)%, P=0.005]。sh-circTNPO1#1+miR阴性对照组裸鼠肿瘤重量[(262.50±82.09)mg]与体积[(203.30±144.20)mm3]均低于对照+miR阴性对照组[分别为(458.80±158.10)mg和(593.00±228.40)mm3, 均P<0.05]。sh-circTNPO1#1+miR-338-3p抑制剂组裸鼠肿瘤重量[(395.40±137.60)mg]与体积[(488.60±208.60)mm3]均高于sh-circTNPO1#1+miR阴性对照组(均P<0.05)。结论 circTNPO1通过靶向吸附miR-338-3p并下调miR-338-3p的表达促进骨肉瘤细胞的增殖与迁移, circTNPO1下调miR-338-3p可能是参与骨肉瘤进展的新机制。

• 单位
  浙江大学医学院附属邵逸夫医院